Western Blot Buffers & Recipes - Mandarin
蛋白质印迹缓冲液与配方
以下为蛋白质印迹缓冲液配方必需的所有材料,包括:封闭缓冲液、lammeli缓冲液、上样缓冲液、运行缓冲液、转移缓冲液和剥离缓冲液。有关蛋白质印迹的完整指南,请<单击此处。
蛋白质印迹是一种用于确定样品中是否存在所选蛋白质的技术。首先,通过凝胶电泳根据大小分离蛋白质。此后,通过使用电流将蛋白质转移到通常为硝酸纤维素膜或PVDF的膜上。然后用对目标蛋白质具有特异性的抗体对膜进行染色,从而可以获取有关蛋白质的定性或半定量信息。
蛋白质印迹缓冲液与配方
封闭缓冲液
- TBST中的5%Marvel
Lameli缓冲液配方
- 4% SDS
- 10%2-巯基乙醇
- 20%甘油
- 0.004%溴酚蓝
- 0.125 M Tris HCl.
- • 检查pH值并将其调至pH6.8。
上样缓冲液配方
- 2X 上样缓冲液
- 100 mM Tris-HCL (pH6.8)
- 200 mM DTT
- 4% SDS
- 0.2% 溴酚蓝
- 20% 甘油
- (应在使用缓冲液之前从1M原液中添加DTT)
NP-40 缓冲液配方
- 150 mM 氯化钠
- 1.0% NP-40(Triton X-100可以代替NP-40)
- 50 mM Tris pH 8.0
分离凝胶配方
- H20 5.9 ml
- 30%丙烯酰胺双酚5mL
- 1.5M Tris pH 8.8 3.8 ml
- 10% SDS 150 µl
- 10% APS 150 µl
- Temed 6 µl
RIPA缓冲液配方
- 50mM Tris HCL pH 7.4,
- 50 mM NaCl,
- 2mM EDTA,
- 1% SDS.
- 新鲜加入的蛋白酶抑制剂(载脂蛋白、亮抑酶肽、DTT和PMSF)
运行缓冲液配方
- 15.1 g TRIZMA,
- 94 g 甘氨酸
- 50 ml of 10% w/v SDS,
- dH20至1升
Tris-HCL 缓冲液
- 20 mM Tris-HCl, pH 7.
Tris-Triton缓冲液
- 10 mM Tris, pH 7.4
- 100 mM NaCl
- 1 mM EDTA
- 1 mM EGTA
- 1% Triton X-100
- 10% 甘油
- 1% SDS
- 5% 脱氧胆酸盐
堆积凝胶配方
- H20 2.7 ml
- 丙烯酰胺-Bis 670 µl
- Tris pH 6.8 500 µl
- 10% SDS 40 µl
- 10% APS 40 µl
- Temed 3 µl
剥离缓冲液
- 62.5 mM Tris-HCL,pH 7.8,
- 100 mM -巯基乙醇,
- 2% (w/v) SDS
TBS-T配方
- 20 mM Tris, pH 7.5
- 150 mM NaCl
- 01% Tween 20
转移缓冲液配方
- 8gTrizma碱
- 9g 甘氨酸
- 37g SDS 粉末
- 200ml 甲醇
- 多至1L的dH20